競爭抑制 ELISA ，其主要原理是將標(biāo)本中的靶分子和一定量的靶分子標(biāo)記物競爭與酶標(biāo)板上固相抗體結(jié)合。 標(biāo)本中靶分子量愈多，結(jié)合在酶標(biāo)板上的靶分子標(biāo)記物愈少，最后的顯色也愈淺，也就是說，顯色的深淺與樣本中靶分子含量成負(fù)相關(guān)。小分子類激素、小分子藥物等 ELISA 測定多用此法。這是因為小分子半抗原或多肽半抗原，缺乏兩個以上的抗體結(jié)合位點，無法形成雙抗體夾心結(jié)果，對用競爭抑制法定量檢測。

如何分析檢測數(shù)據(jù)測算結(jié)果呢？在這里為大家推薦一種方法，用EXCEL 軟件即可完成結(jié)果測算。

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方法

以云克隆公司的去甲腎上腺素(NE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)（CEA907Ge）為例，進(jìn)行詳細(xì)講解。與雙夾心法 ELISA 不同的是，競爭抑制 ELISA 的標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值并不需要減去陰性對照孔的本底吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品的各孔吸光度值為 x 軸，標(biāo)準(zhǔn)品各濃度取 Log10 后的值為 y 軸作 XY 散點圖，得到一條 5 點曲線，其中 X 軸為吸光度（Optical Density），Y 軸為濃度的對數(shù)值（Log. of Concentration）。

圖1為CEA907Ge的一次實驗結(jié)果，包括標(biāo)準(zhǔn)品和部分樣本測值。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品和部分樣本測值

CEA907Ge試劑盒的檢測范圍是61.7-5000ng/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品各個濃度孔依圖2羅列在第1列，第2列和第3列為各濃度標(biāo)準(zhǔn)品測得的O.D.值，第4列為O.D.值平均值，第5類為濃度的對數(shù)值（標(biāo)準(zhǔn)品各濃度取對數(shù)值）。詳見圖2。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

選定圖2黃色區(qū)域，點擊菜單欄“插入”后點擊“插入散點圖”（見圖2），得到 5 點組成的散點圖（圖3）。

圖3 散點圖

在散點圖（圖3）的5點中任選一點以右鍵打開，選擇”添加趨勢線(R)”，圖表上右會彈出一個對話框。在“趨勢線選項”點擊“趨勢線”，選擇“多項式”，并將“順序”設(shè)定為 2 。最后，勾選“顯示公式(E)”和“顯示 R 平方值(R)”（如圖 4 所示），便會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的對應(yīng)公式及 R^2 值（如圖 6 所示）。

圖 4 標(biāo)準(zhǔn)曲線示例圖

2、樣本濃度測算

如圖5，將樣本O.D.值取平均值（綠色列）作為X帶入公式中，得到Y(jié)值,作以10為底的指數(shù)運算，若樣本原液檢測，測算的Y值為樣本濃度，若樣本稀釋后檢測，測算的Y值乘以稀釋倍數(shù)，為樣本的濃度（紫色列）。

圖 5 樣本濃度測算