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?原發(fā)性肝癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，肝癌年死亡率占所有腫瘤年死亡率的第二位，我國(guó)肝癌發(fā)病率及死亡率更是居世界之首，占每年肝癌新發(fā)病率及死亡人數(shù)的55%，且有逐年增加的趨勢(shì)。因其惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，生長(zhǎng)快，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性，被稱(chēng)為“癌中之王”。盡管目前各種手術(shù)、化療等治療手段在不斷提高，但效果仍欠佳。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)、基因組學(xué)的蓬勃發(fā)展，肝癌的基因治療已成為當(dāng)前肝癌治療研究的熱點(diǎn)。

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?建立腫瘤動(dòng)物模型是研究腫瘤發(fā)病機(jī)制及開(kāi)展腫瘤治療相關(guān)研究的重要手段。動(dòng)物模型應(yīng)該盡可能的接近人類(lèi)腫瘤的自然生物學(xué)過(guò)程，包括腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。建立良好的肝癌動(dòng)物模型對(duì)于模擬人體肝癌形成及抗腫瘤免疫應(yīng)答研究具有很好的替代作用。

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?目前實(shí)驗(yàn)室中常用的是移植型肝癌模型，移植型模型根據(jù)移植瘤所在部位可分為原位型和異位型。通過(guò)向裸鼠肝臟注射肝癌細(xì)胞建立肝臟原位腫瘤模型，觀(guān)察其原位成瘤的過(guò)程及狀態(tài)，能較好的模擬人體肝癌生長(zhǎng)過(guò)程，為進(jìn)一步抗肝癌免疫研究提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；而異位型多見(jiàn)于在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部皮下注射一定量的肝癌細(xì)胞形成腫瘤，皮下瘤操作簡(jiǎn)單容易掌握，成功率高，且腫瘤體積變化易于測(cè)量，容易給予局部干預(yù)。

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?武漢云克隆可為您提供裸鼠肝內(nèi)成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，并可根?jù)您的具體要求完成相應(yīng)的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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?裸鼠肝臟原位成瘤實(shí)驗(yàn)方法：

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?1）將標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)的處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光素酶基因標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞人肝癌細(xì)胞株HepG2-luc消化、離心，將所得的約5×10⁶個(gè)細(xì)胞溶于0.1 mL DMEM培養(yǎng)液待用。

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?2）使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠（SPF級(jí)無(wú)胸腺Balb/C-nude裸鼠，雄性，周齡為4~5周，體重為15g~20g），待麻醉生效后，開(kāi)腹暴露肝臟，用1ml胰島素注射針取準(zhǔn)備好的細(xì)胞注射于裸鼠肝臟內(nèi)，用5-0絲線(xiàn)縫合傷口，活力碘消毒傷口，將裸鼠放在加熱墊上，待清醒后正常飲食飼養(yǎng)。

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?3）熒光活體成像檢測(cè)：在成瘤后對(duì)裸鼠進(jìn)行熒光活體成像檢測(cè)，成像前使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，再通過(guò)腹腔注射3mg底物luciferin，底物注射10分鐘后進(jìn)行熒光活體成像檢測(cè)。圖1為裸鼠HepG2-luc細(xì)胞肝臟原位注射1周后熒光活體成像圖。

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?4）四周后頸椎離斷，處死小鼠，解剖尸體，觀(guān)察肝臟腫瘤生長(zhǎng)狀況。所有可疑組織均做好標(biāo)記，拍照。圖2為裸鼠HepG2-luc細(xì)胞肝臟原位注射4周后肝臟圖。

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?而裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)只需將標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)的處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞消化、離心，將所得的約5×10⁶個(gè)細(xì)胞溶于 0.1 mL DMEM培養(yǎng)液，注射于裸鼠右側(cè)背部皮下即可。選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重15-20g左右，接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約25px深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。接種后一周左右可以見(jiàn)到皮下開(kāi)始出現(xiàn)腫塊，四周左右出現(xiàn)皮下成瘤。圖3為裸鼠HepG2細(xì)胞皮下注射4周后裸鼠圖。

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